FAOBlue脂肪酸β-氧化（FAO）活性熒光定量試劑應(yīng)用實(shí)例

應(yīng)用實(shí)例

一、FAOBlue及其香-豆-素衍生物的吸收光譜和熒光光譜

在PBS緩沖液（pH 7.4）中，F(xiàn)AO代謝后釋放的FAOBlue和香-豆-素衍生物的吸收光譜（左）、熒光光譜（右）。

FAOBlue經(jīng)過FAO轉(zhuǎn)化為香-豆-素衍生物后，吸收峰從FAOBlue發(fā)生偏移至405 nm。因此，在405 nm的激發(fā)條件下，F(xiàn)AOBlue不會(huì)發(fā)出熒光，只有在通過FAO釋放香-豆-素衍生物時(shí)才會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光。

注：FAOBlue在300-380 nm（最大350 nm）激發(fā)時(shí)顯示藍(lán)色熒光（灰色線，370-450 nm），所以在選擇濾光片時(shí)請(qǐng)格外注意，避免同時(shí)激發(fā)未反應(yīng)的FAOBlue以及FAO反應(yīng)后的香-豆-素衍生物。

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二、各種癌細(xì)胞中FAO活性可視化

在4種癌細(xì)胞中加入FAOBlue，培養(yǎng)一定時(shí)間后進(jìn)行熒光觀察。所有細(xì)胞都出現(xiàn)藍(lán)色熒光，而經(jīng)過FAO抑制劑etomoxir處理后藍(lán)色熒光顯著減少。這些數(shù)據(jù)表明，藍(lán)色熒光是由活細(xì)胞中FAO活性引起的。（注：實(shí)驗(yàn)條件根據(jù)細(xì)胞類型不同而不同）

※HepG2 : 5 μM, 30 min、 LNCaP: 20 μM, 120 min、HeLa : 20 μM, 120 min、A549 : 5 μM, 30 min

三、藥物對(duì)FAO活性的干擾

對(duì)HepG2細(xì)胞分別進(jìn)行AICAR（通過 AMPK 激活的 FAO 激活劑）和ranolazine（部分 FAO 抑制劑）處理，隨后加入FAOBlue（5uM）孵育30分鐘。結(jié)果顯示，與對(duì)照細(xì)胞（未處理）相比，AICAR處理后明顯增加藍(lán)色熒光強(qiáng)度，ranolazine處理后則明顯降低藍(lán)色熒光強(qiáng)度。

四、藥物對(duì)FAO活性影響的定量分析

將HepG2細(xì)胞與不同濃度的ND630預(yù)孵育4小時(shí)。ND630處理后，加入FAOBlue（5uM）孵育30分鐘。結(jié)果表明，伴隨ND630濃度增加，藍(lán)色熒光強(qiáng)度隨之增加。由此可知，ND630可增強(qiáng)FAO活性。（注：ND630是乙酰-CoA羧化酶抑制劑，被認(rèn)為是治療非酒精性脂肪肝（NAFLD）的潛在藥物）

五、NASH模型小鼠的FAO活性分析

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一種與脂質(zhì)相關(guān)的疾病，表現(xiàn)為脂肪酸代謝活性低。向正常小鼠和NASH模型小鼠以口服形式給藥增強(qiáng)脂質(zhì)代謝的bezafibrate后，提取原代肝細(xì)胞。向各組細(xì)胞加入FAOBlue（5 μM）觀察其FAO活性，結(jié)果顯示，相較正常小鼠來源細(xì)胞，NASH模型小鼠來源細(xì)胞的FAO活性明顯被抑制。另外，給藥bezafibrate的NASH模型小鼠來源細(xì)胞中FAO活性被恢復(fù)。

產(chǎn)品文獻(xiàn)

Uchinomiya et al., Chem. Commun., 56, 3023-3026 (2020) Fluorescence Detection of Metabolic Activity of Fatty Acid Beta Oxidation Activity in Living Cells.

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