AOBlue (Fatty Acid Oxidation Detection Reagent)產(chǎn)品及原理介紹

Funakoshi品牌（國內(nèi)授權(quán)代理商欣博盛生物）的FAOBlue是一款可通過熒光成像將活細胞內(nèi)脂肪酸β-氧化（FAO）活性可視化的試劑。只需將產(chǎn)品添加到培養(yǎng)基中，即可通過熒光觀察定量脂肪酸β-氧化活性。

FAO（脂肪酸β-氧化，F(xiàn)atty acid beta-oxidation）

脂肪酸（FA）是多種脂質(zhì)的基本成分，是細胞的重要組成部分，同時也是能量的主要來源之一。FA降解的主要途徑是通過線粒體脂肪酸β-氧化（FAO）。FAO 是肝臟、心臟和骨骼肌等器官能量平衡的關(guān)鍵代謝途徑。

FAO是一個復雜的生化過程，涉及多種酶的參與。FAO主要分為以下四個步驟：

1) 脫氫：脂酰-CoA 被?；鵆oA脫氫酶氧化成烯?；?CoA；

2) 水合：烯酰-CoA-被烯酰-CoA水合酶合成-3-羥基乙酰-CoA；

3) 氧化：3-羥基乙酰-CoA轉(zhuǎn)化為 3-酮酰-CoA；

4) 硫解：3-酮酰-CoA轉(zhuǎn)化為?；?CoA（Cn-2）和乙酰-CoA。乙酰-CoA進一步轉(zhuǎn)化為ATP。生成的酰基-CoA（Cn-2）進入另一個FAO循環(huán)，進一步生成?；?CoA（Cn-4）。

研究表明，F(xiàn)AO代謝異常與肥胖和非酒精性脂肪肝?。∟AFLD）等多種疾病密切相關(guān)，因此檢測FAO活性對于診斷相關(guān)疾病至關(guān)重要。但由于FAO過程較為復雜，使得在活細胞中檢測FAO活性的方法非常有限。目前只有一些間接方法，如使用含放射性同位素的脂肪酸或測量耗氧量。

FAOBlue作為首-款直接測量活細胞中FAO活性的試劑，只需在培養(yǎng)基中加入FAOBlue，即可通過熒光成像，簡單地檢測出活細胞中FAO的活性。

FAOBlue原理

FAOBlue是一種具有被乙酰氧甲基酯保護的壬酸（C9）的香-豆-素染料。在被FAO代謝之前，F(xiàn)AOBlue在405 nm下不會激發(fā)熒光。FAOBlue的乙酰氧基甲酯可被細胞內(nèi)的酯酶水解，使FAOBlue可直接穿透細胞膜進入細胞，轉(zhuǎn)化為游離脂肪酸（Free FA type）；Free FA type會轉(zhuǎn)化為Acyl-CoA，并進入FAO循環(huán)；Acyl-CoA 經(jīng)過3次FAO循環(huán)分解為含有丙酸（C3）的非熒光香-豆-素。經(jīng)過第4次FAO循環(huán)后，香-豆-素染料從丙酸中釋放出來并擴散到整個細胞。此時整個細胞內(nèi)的香-豆-素在405 nm下發(fā)出強烈的藍色熒光，可視化地定量檢測細胞中FAO的活性。

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品特點

操作簡單，加入培養(yǎng)基后，孵育30-120min即可觀察熒光；

實例驗證適用于多種細胞類型。

產(chǎn)品應用

FAO活性的相對定量

評估藥物對FAO活性的影響

實驗步驟

使用前請先按照說明書中的Reconstitution步驟，用DMSO對FAOBlue試劑進行溶解，制成Stock solution，按照說明書中的要求保存。

以下實驗步驟僅供參考，請按照產(chǎn)品說明書操作：

1、在新鮮的HEPES緩沖液（HBS）中加入FAOBlue（最終濃度為5-20μM）；

注：可用無血清培養(yǎng)基代替HBS

2、去除培養(yǎng)基，用HBS清洗細胞2次；

3、向細胞中加入含F(xiàn)AOBlue的HBS；

4、在37℃下培養(yǎng)30 min以上；

注：不同細胞類型最佳培養(yǎng)時間有所不同，建議根據(jù)具體情況而定。

5、用HBS清洗細胞；

6、通過成像觀察活細胞中的藍色熒光（Ex. 405 nm/Em. 430～480 nm）。

成像指南

激光共聚焦顯微鏡：使用顯微鏡中配備的405 nm激光

落射熒光顯微鏡：激發(fā)濾光片非常重要，建議使用波長為 390-450 nm的激發(fā)濾光片

如需購買Funakoshi產(chǎn)品，咨詢產(chǎn)品技術(shù)問題，請聯(lián)系Funakoshi授權(quán)代理商欣博盛生物。