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Mabtech帶您了解ELISpot和FluoroSpot中如何選擇細(xì)胞刺激物

更新時(shí)間:2024-11-29   點(diǎn)擊次數(shù):635次

使用ELISpot和FluoroSpot檢測(cè)抗原特異性免疫反應(yīng),通常需要在體外刺激細(xì)胞。如何選擇用于刺激的化合物很大程度上取決于細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)。刺激物一般可以是抗體、肽、合成化合物或微生物或植物中純化的物質(zhì)等。Mabtech提供許多不同的抗原特異性刺激肽庫(kù)(peptide pool),所有這些刺激物都經(jīng)過(guò)驗(yàn)證和優(yōu)化,非常適用于作為ELISpot和FluoroSpot檢測(cè)對(duì)照或用于鑒定抗原特異性免疫反應(yīng)。


Mabtech提供的肽庫(kù)有2種:defined和scanning 形式。Scanning 形式的肽庫(kù)一般適用于不需要提前知道相關(guān)表位信息的檢測(cè),該形式的肽庫(kù)被設(shè)計(jì)用于覆蓋整個(gè)蛋白質(zhì)或結(jié)構(gòu)域。通常以11個(gè)氨基酸重疊的15個(gè)氨基酸短肽形式提供,可以跨越整個(gè)感興趣的蛋白質(zhì)的序列。15個(gè)氨基酸短肽能夠刺激CD4+ T細(xì)胞,當(dāng)加入到培養(yǎng)的細(xì)胞中時(shí),它們可以被蛋白酶修剪成更短的肽,從而刺激CD8+ T細(xì)胞。因此,scanning 形式的肽庫(kù)可以用于刺激任何T細(xì)胞和樣品。一般來(lái)說(shuō),如果您不確定樣本中HLA/MHC的組成,scanning 形式的肽庫(kù)是一個(gè)比較好的選擇。


Defined 形式的肽庫(kù)是針對(duì)特定HLA/MHC分子的肽。這些肽已經(jīng)被鑒定為免疫顯性的,會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。如果您知道研究樣本中的HLA組成,那么Defined 形式的肽池是首-選。


Mabtech可提供一系列針對(duì)特定研究的肽庫(kù)產(chǎn)品:

刺激物名稱(chēng)

刺激細(xì)胞類(lèi)型

產(chǎn)品描述

刺激后分泌物

Mabtech產(chǎn)品貨號(hào)

PepPool: TB   (EspC), scanning

T cells   (scanning pool)

T cell epitopes   from the Mycobacterium tuberculosis ESX-1 secretion-associated protein EspC

IFN-γ, IL-2,

3623-1

PepPool: TB   (ESAT-6), scanning

T cells   (scanning pool)

T cell epitopes   from the Mycobacterium tuberculosis early secretory antigenic target (ESAT-6)   protein

IFN-γ, IL-2,

3624-1

PepPool: TB   (CFP-10), scanning

T cells   (scanning pool)

T cell epitopes   from the Mycobacterium tuberculosis culture filtrate protein (CFP-10)

IFN-γ, IL-2,

3625-1

PepPool: CMV   (CD4 and CD8), human

CD4+ and CD8+ T   cells

T cell epitopes   from Cytomegalovirus (CMV) proteins

IFN-γ, IL-2,    IL-5,  IL-13

3619-1

PepPool:   CyCMV+RhCMV (TP-UL83+Rh112), scanning

T cells   (Macaque)

T cell epitopes   from cynomolgus cytomegalovirus (CyCMV) Tegument phosphoprotein UL83, and   from rhesus cytomegalovirus (rhCMV) Rh112

IFN-γ, IL-2

3692-1

PepPool: EBV   (CD4 and CD8), human

CD4+ and CD8+ T   cells

T cell epitopes   from latent and lytic Epstein-Barr virus (EBV) proteins.

IFN-γ, IL-2

3641-1

PepPool: AdV5   (hexon), human

T cells

T cell epitopes   from the human adenovirus 5 (hAdV5) hexon protein

IFN-γ, IL-2

3634-1

PepPool:   Vaccinia (CD4), human

CD4 T cells

T cell epitopes   from several Vaccinia proteins. Of the included peptides, 91% share >90%   homology with mpox virus

IFN-γ

3635-1

PepPool:   Vaccinia (CD8), human

CD8 T cells

T cell epitopes   from several Vaccinia proteins. Of the included peptides, 79% share >90%   homology with mpox virus

IFN-γ

3670-1

PepPool:   SARS-CoV-2 (SNMO), human

T cells

T cell epitopes   from the SARS-CoV-2 spike protein (S), nucleoprotein (N), membrane protein   (M), and the open reading frame (ORF)-3a and ORF-7a proteins (O)

IFN-γ, IL-2, Granzyme B

3622-1

PepPool:   SARS-CoV-2 (S), human

T cells

T cell epitopes   from the SARS-CoV-2 spike protein (S)

IFN-γ, IL-2, Granzyme B

3630-1

PepPool:   SARS-CoV-2 (NMO), human

T cells

T cell epitopes   from the SARS-CoV-2 nucleoprotein (N), membrane protein (M), and the open   reading frame (ORF)-3a and ORF-7a proteins (O)

IFN-γ, IL-2, Granzyme B

3632-1

PepPool:   SARS-CoV-2 (S1), scanning

T cells   (scanning pool)

T cell epitopes   from the S1 domain of the SARS-CoV-2 spike protein

IFN-γ, IL-2, Granzyme B

3629-1

PepPool:   SARS-CoV-2 Omicron BA.1 (S1), scanning

T cells   (scanning pool)

Similar to the   (S1) scanning pool, but including Omicron BA.1 mutations

IFN-γ, IL-2, Granzyme B

3636-1

PepPool: BKV   (CD4 and CD8), human

T cells

T cell epitopes   from the large T protein, small T protein, and VP1 protein. Included peptides   share 80% homology with JC virus.

IFN-γ

3675-1

PepPool: TBEV   (C+E), scanning

T cells   (scanning pool)

T cell epitopes   from the capsid (C) protein and the envelope (E) protein

IFN-γ, IL-4, IL-5

3672-1

PepPool: DENV   (CD8), human

CD8 T cells

T cell epitopes   from the capsid protein (C), envelope protein (E), and the non structural   (NS) proteins. Coverage of all major HLA class I supertypes for Dengue virus   serotypes 1, 2, 3, and 4

IFN-γ

3695-1

PepPool: DENV   (CD4), human

CD4 T cells

T cell capsid   protein (C), precursor membrane protein (prM), envelope protein (E), and the   non structural (NS) proteins. Good HLA class coverage for Dengue virus   serotypes 1, 2, 3, and 4

IFN-γ

3698-1


T細(xì)胞激活的常用試劑是植物血凝素(PHA)、PMA、離子霉素和CD3抗體。誘導(dǎo)特異性反應(yīng)的抗原也是一個(gè)比較好的選擇,因?yàn)榭乖男蛄忻鞔_并能更好確認(rèn)特異免疫反應(yīng)的激活。例如ELISpot和FluoroSpot可以檢測(cè)抗原特異性人CD8 T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ。對(duì)于這個(gè)應(yīng)用,Mabtech可以提供陽(yáng)性抗原特異性對(duì)照——PepPool: CEF (CD8), human(貨號(hào):3616-1)。還有用于刺激CD4 T細(xì)胞的肽庫(kù)。

Mabtech帶您了解ELISpot和FluoroSpot中如何選擇細(xì)胞刺激物

圖1.PepPool: CEF (CD8), human明顯刺激CD8 T細(xì)胞


記憶B細(xì)胞在分泌抗體前通常需要使用合成化合物R848 (TLR 7/8激動(dòng)劑)和重組IL-2蛋白的混合物進(jìn)行刺激。Mabtech可提供針對(duì)人和小鼠的B細(xì)胞刺激的R848和IL-2套裝——StimPack: Memory B cells, human(貨號(hào):3660-1)和StimPack: Memory B cells, mouse(貨號(hào):3661-1)。


Toll樣受體(TLRs)的配體可用于刺激單核細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞。脂多糖(LPS)通過(guò)TLR4發(fā)揮作用,能有效刺激IL-1β、IL-6和TNF-α等因子的分泌。化合物R848是TLR7/8的配體,刺激IL-1β等物質(zhì)的分泌。


適用于作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照的不同免疫細(xì)胞的刺激物:

刺激物名稱(chēng)

刺激細(xì)胞類(lèi)型

產(chǎn)品描述

刺激后分泌物

Mabtech產(chǎn)品貨號(hào)

PepPool: CEF   (CD8), human

CD8+ T cells   (human)

Ag-specific   stimulation by T cell epitopes derived from CMV, EBV and influenza.

IFN-γ, IL-2, Granzyme B,   Perforin

3616-1

PepPool: CEF   extended (CD8), human

CD8+ T cells   (human)

Ag-specific   stimulation by T cell epitopes derived from CMV, EBV, and influenza

IFN-γ, IL-2, Granzyme B,   Perforin

3618-1

PepPool: CEFTA   (CD4), human

CD4+ T cells   (human)

Ag-specific   stimulation by T cell epitopes derived from CMV, EBV, TT and influenza.

IFN-γ, IL-2, IL-5, IL-13

3617-1

Anti-human CD3   mAb (CD3-2), azide free

T cells (human)

Polyclonal T   cell activation

IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 and IL-17A

3605-1

Anti-monkey CD3   mAb (CD3-1), azide free

T cells   (non-human primate)

Polyclonal T   cell activation

IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-13 and IL-17A

3610-1

Phytohemagglutinin (PHA)

T cells

Polyclonal T   cell activation

IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13,   IL-17A, IL-21, GM-CSF, Granzyme B, Perforin

/

StimPack: Memory   B cells, human

B cells (human)

Polyclonal   B-cell activation (R848 + recombinant hIL-2)

IgG, IgA, IgM

3660-1

StimPack: Memory   B cells, mouse

B cells (mouse)

Polyclonal   B-cell activation (R848 + recombinant mIL-2)

IgG, IgA, IgM

3661-1

Anti-human CD40   mAb (S2C6), azide free + recIL-4

B cells

Polyclonal   B-cell activation

IgE

3601-1

Lipopolysaccharide   (LPS)

Monocytes/DC

TLR4 agonist

IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-23, GM-CSF,   TNF-α

/

R848

Monocytes/DC

TLR7/8 agonist

IFN-α, IL-1β, IL-6, IL-23, GM-CSF, TNF-α

/



更多產(chǎn)品詳情請(qǐng)聯(lián)系Mabtech中國(guó)授權(quán)代理-欣博盛生物


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