生物試劑內毒素如何檢測？

內毒素污染

內毒素，又稱脂多糖（LPS），是革蘭氏陰性細菌的主要細胞壁成份。內毒素的來源包括培養基、血清、水、緩沖溶液和其他細胞培養試劑，如胰蛋白酶。內毒素是體內外炎癥反應的有效誘導劑。內毒素污染是細胞培養和生產注射藥物中的主要問題。溶液和試劑可能是無菌但仍含有細菌成分，因此監測細胞培養試劑中是否存在內毒素至關重要。

注意：“內毒素"有時候用于描述細菌其他組成部分（如鞭毛蛋白），但在細菌學中它僅指脂多糖。

LPS的基本結構

常見的內毒素污染源？

水 — 使用高純度水制備培養基和溶液，清潔玻璃器皿。

玻璃器皿 — 為了消除內毒素，必須將玻璃器皿加熱至250°C維持≥30分鐘，或加熱到180°C維持 3 小時1。

培養液、血清和添加劑 — 使用前要求制造商提供內毒素水平認證或測試。

塑料容器 — 要求制造商提供內毒素水平和無致熱源的證明。

讓 InvivoGen 保障您的安全 ！所有InvivoGen的試劑都經過徹-底測試，以確保不存在細菌污染，包括內毒素。

我的實驗有什么風險？

內毒素在體外和體內實驗均可引起顯著的不穩定性。脂質A部分能夠激活細胞表面或內體的Toll樣受體4（TLR4），誘導MAP激酶（MAPK）、NF-κB和IRF（干擾素調節因子）通路的激活。盡管內毒素的作用隨濃度和細胞類型的不同而改變，但它們確實可以改變細胞形態、影響增殖和轉染效率。此外，LPS還誘導了炎性細胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的產生，并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非經典炎癥小體，導致細胞焦亡。

在體內實驗，低內毒素濃度可刺激免疫系統，而高濃度可引起發燒、低血壓、多器官衰竭，甚至死亡。

內毒素在體內外的主要影響

1.?Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2.?Leider, R. et al. 2013., 3.?Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4.?Rathinam VAK. et al., 2019

生物試劑內毒素檢測

HEK-Blue™ LPS 檢測試劑盒 2

基于細胞的比色法分析

• 用途廣泛：適用于幾乎所有的生物試劑

• 高靈敏度：檢測限為0.01 EU/ml

• 經濟實惠：1個試劑盒最多可進行500次測試

HEK-Blue™ LPS 檢測試劑盒2的原理

試劑盒依賴于InvivoGen專有的HEK-Blue™-4細胞，該細胞穩定表達人源TLR4和一個NF-κB誘導的分泌型胚胎堿性磷酸酶（SEAP）報告基因。

簡單的實驗程序使該試劑盒成為常規測試的理想選擇。只要樣品中含有微量的LPS，在與HEK-Blue™-4細胞孵育過夜后，會導致NF-κB的激活和SEAP報告基因的表達。培養上清液中的SEAP活性通過加上底物QUANTI-Blue™溶液，并使用分光光度計在620-655 nm的波長測量。吸光度與內毒素含量成正比。使用試劑盒中提供的HEK-Blue™內毒素標準品，經系列稀釋獲得標準曲線從而計算內毒素濃度（大腸桿菌055:B5 LPS的制備參照FDA批準的內毒素工作標準品（CSE）制備標準）。HEK-Blue™ LPS檢測試劑盒2 在InvivoGen公司內部用作常規檢測。

使用該試劑盒的5大原因

1.替代昂貴而耗時的鱟試劑（LAL）。

購買此套件一次，凍存HEK-Blue™-4細胞，以后只需重新訂購其他耗材。

2.與LAL分析不同，如果樣品含有(1,3)-β-D-葡聚糖，使用HEK-Blue™-4細胞進行LPS檢測不會導致假陽性。

3.適用于所有生物樣品，包括培養基、血清、化學制劑和疫苗佐劑。

4.溶液顏色從粉紅色變為紫/藍色表示 陽性反應，結果簡單可視。

5.包括一本實驗程序小冊子，計算內毒素濃度的方法，以及疑難排解部分。

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