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GeneTex重組兔單克隆抗體,助力您的科研之路

更新時間:2024-07-22   點擊次數:671次

自1997年始,GeneTex一直致力于為科研、醫藥、診斷開發高質量水平的抗體。目前市場上存在很多低質量的抗體,主要表現在有明顯的非特異性信號;為了提供抗體的特異性和可重復性,必須解決兩個問題,第一是廣泛采用重組抗體技術的生產平臺,第二是采取更多的驗證策略。為了通過創新技術給客戶提供更好的產品,GeneTex已將所有新生產轉向重組兔單克隆抗體,也采取更多的驗證策略,提供更多的高質量水平抗體。


什么是重組抗體?

重組抗體 (Recombinant antibody,rAb) 是通過傳統雜交瘤方法、單獨或組合展示策略、從免疫動物中分選單個B細胞或通過任一種方法獲得的選定單克隆抗體的克隆。重組抗體是由其一級序列定義的,可以對其進行工程改造以優化親和力并以不同的結合形式表達,重組抗體的眾多優點已得到充分證明,其中性能的一致性至關重要。

GeneTex的重組抗體生產采用以多參數FACS為基礎的方法,從免疫動物中分離抗原特異性IgG+記憶B細胞,隨后將抗體可變區基因克隆到IgG主鏈中,并在哺乳動物細胞中表達(圖1)(ref 1)。該方法非常快速,可以在幾周內完成,并且還提供了鑒別出在各種應用中具有不同功能抗體的機會,重要的是,它是從同一B細胞克隆重鏈和輕鏈,從而保留自然配對,一旦完成克隆,特定的重組抗體就可以取之不盡用之不竭,并且具有出色的重復性。

GeneTex 重組兔單克隆抗體生產流程.png

圖1:GeneTex 重組兔單克隆抗體生產流程(Starkie 等人 (2016))


GeneTex重組兔單克隆抗體

GeneTex 的生產重點是創建新型重組兔單克隆抗體,并使用國際抗體驗證工作組(IWGAV)定義的嚴格方法進行驗證。結合重組抗體生產的重點,GeneTex對抗體可靠性的第二個承諾是將依照上述IWGAV提出的嚴格驗證方法納入其制造和質量保證 (QA) 工作流程(ref 2),使用IWGAV報告定義的五個驗證策略中的至少一個來評估每個抗體,GeneTex版本的IWGAV遵循五個驗證策略,包括 (1) 敲除敲弱策略;(2) 比較抗體策略;(3) 免疫捕獲及質譜分析(IP/MS);(4) 生物特性與正交策略;(5) 蛋白過表達策略(圖2)。在提及新的重組抗體生產時,GeneTex將此稱為“5+1"驗證策略,“+1"指的是來自于重組抗體生產過程中的事前驗證。

使用上述生產和驗證方法生成和評估的新重組兔單克隆抗體(這些產品在其克隆名稱中用“HL"標識)。這僅僅是一個開始,GeneTex還致力于用新的重組抗體取代其成功的多克隆體。

GeneTex用于重組抗體驗證的.png

圖2:GeneTex用于重組抗體驗證的“5+1"驗證策略


為什么GeneTex源自于兔的HL克隆是更好的選擇?

GeneTex的重組兔單克隆抗體生產工藝是全部源自于兔的新型抗體生成平臺(ref 1),這些產品通過其各自克隆號中的“HL"名稱進行區分(例如“[HL1089]")。

眾-所-周-知,兔的免疫系統,可以為產生單克隆抗體帶來以下顯著優勢(圖3)(ref 3):

l   更廣泛的抗體庫

1、兔屬于兔形目,在進化上與嚙齒目不同,說明人類抗原呈現的表位在兔中通常比在小鼠中更具有免疫原性,從而增加了生成的抗體數量,這些抗體反過來可能與鼠蛋白同源物發生交叉反應 (ref 3-6)。

2、兔免疫系統在對半抗原或小分子抗原產生免疫反應方面更成功,而鼠免疫系統通常不會出現這種情況 (ref 3-6)。

3、用于產生單克隆抗體的小鼠來自近交系,其免疫原性的反應多樣性低于兔;且小鼠脾臟比兔子脾臟小得多 (ref 3-6)。

4、兔的免疫系統與小鼠和人類的不同之處在于,除了執行與小鼠和人類相同的V(D)J和VJ重組以及體細胞超突變 (SHM) 機制之外,它還利用體細胞基因轉換 (SGC) 來擴展其抗體范圍,抗體多樣性通過其他過程進一步增強,包括kappa輕鏈可變基因結構,其獨-特之處在于互補決定區3 (LCDR3) 長度的可變性,以及骨髓、腸道相關淋巴組織中的連續Ig發育,以及脾臟和淋巴結生發中心(ref 4,6)。

l   更簡單的Ig結構

1、已知歐洲兔(Oryctolagus cuniculus)具有IgE和IgM單一基因,沒有IgD基因。有趣的是,它的基因組包含13個IGHA基因,編碼至少10個功能性IgA亞類,盡管存在等位基因變異,但兔只有一種IgG基因(沒有亞類),因此與小鼠和人類(各有4個IgG亞類)不同 (ref 5,6)。

2、除了人或小鼠IgG中發現的二硫鍵(將重鏈對或一條重鏈與其相關輕鏈連接)之外,兔IgG抗體在其K1輕鏈中還表現出獨-特的鏈內二硫鍵,新西蘭白兔中大約90%的IgG是IgG-k (K1),并且這種額外的鍵被認為賦予兔IgG穩定性 (ref 3,6)。

l   更高的結合親和力

1、兔單克隆抗體具有非常高的親和力,Kd值在皮摩爾范圍內,其中一些具有極低的皮摩爾Kd值 (ref 3,6)。

2、皮摩爾Kds意味著更高的靈敏度和一致的特異性。

l   更大的淋巴細胞庫

1、兔的壽命更長,而且體型更大(三個月大的兔子和六周大的小鼠的體重可能相差100倍),大大地方便了抗體生產過程中的血液和組織取樣 (ref 6)。

2、與鼠脾臟相比,兔脾臟可分離出多50倍的B細胞,這說明有更多可識別更廣泛表位的克隆可以選擇 (ref 3-6)。

兔生產單克隆抗體的優勢.png

圖3:兔生產單克隆抗體的優勢


部分精選重組兔單克隆抗體

驗證.png



G蛋白偶聯受體,GPCRs

GTX637589

RAI3 antibody [HL1864]


GTX636952

Dopamine Receptor D2 antibody [HL1478]


GTX639056

CXCR2 antibody [HL2604]


腫瘤研究

GTX635362

RAS (G12D Mutant) antibody [HL10]


GTX635975

PD-L1 antibody [HL1041]


GTX635479

53BP1 antibody [HL275]


神經科學研究

GTX635363

Iba1 antibody [HL22]


GTX636725

GFAP antibody [HL1307]


GTX636586

Calbindin antibody [HL2378]


病毒研究

GTX637298

Zika Virus Envelope protein antibody [HL1699]


GTX636703

ASFV p54 antibody [HL1289]


GTX636318

Influenza A Virus Nucleoprotein antibody [HL1103]


免疫學研究

GTX636887

IL1 beta antibody [HL1421]


GTX632502

CXCL16 antibody [GT516]


GTX636896

Gasdermin D antibody [HL1430]


代謝研究

GTX637799

Apolipoprotein B antibody [HL1962]


GTX636995

FABP4 antibody [HL1521]


GTX638193

Fatty Acid Synthase antibody [HL2161]


蛋白翻譯后修飾相關抗體

GTX635617

ERK1 (phospho Thr202/Tyr204) + ERK2 (phospho Thr185/Tyr187) antibody [HL173]


GTX636086

ATM (phospho Ser1981) antibody [HL1062]


GTX635799

JNK (phospho Thr183/Tyr185) antibody [HL1008]


細胞器標記

GTX638140

alpha Tubulin antibody [HL2162]


GTX70141

DNA ligase I antibody [10H5]


GTX636469

Cytokeratin 19 antibody [HL1165]


表位標記、報告和載體抗體

GTX637082

HA tag antibody [HL1603]


GTX637570

GFP antibody [HL1845]


GTX637460

CRM197 antibody [HL1808]



參考文獻

1、Starkie, Dale O et al. “Generation of Recombinant Monoclonal Antibodies from Immunised Mice and Rabbits via Flow Cytometry and Sorting of Antigen-Specific IgG+ Memory B Cells." PloS one vol. 11,3 e0152282. 29 Mar. 2016, doi:10.1371/journal.pone.0152282.

2、Uhlen, Mathias et al. “A proposal for validation of antibodies." Nature methods vol. 13,10 (2016): 823-7. doi:10.1038/nmeth.3995.

3、Feng, Lifeng et al. “Rabbit monoclonal antibody: potential application in cancer therapy." American journal of translational research vol. 3,3 (2011): 269-74.

4、Mage, Rose G et al. “B cell and antibody repertoire development in rabbits: the requirement of gut-associated lymphoid tissues." Developmental and comparative immunology vol. 30,1-2 (2006): 137-53. doi:10.1016/j.dci.2005.06.017.

5、Pinheiro, A., Neves, F., Lemos de Matos, A. et al. An overview of the lagomorph immune system and its genetic diversity. Immunogenetics 68, 83–107 (2016).

6、Weber, Justus et al. “From rabbit antibody repertoires to rabbit monoclonal antibodies." Experimental & molecular medicine vol. 49,3 e305. 24 Mar. 2017, doi:10.1038/emm.2017.23.



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