Alpha 突觸核蛋白A53T 突變型PFF

Alpha 突觸核蛋白 A53T PFFs (目錄號(hào) SPR-326) 在培養(yǎng)的原代大鼠神經(jīng)元中誘導(dǎo)絲氨酸 129 磷酸化

培養(yǎng)基中 1 µg/ml 超聲處理的 StressMarq’s Alpha 突觸核蛋白 A53T 突變 PFF（目錄號(hào) SPR-326）

可誘導(dǎo)原代大鼠神經(jīng)元中 Ser129 磷酸化。

來自：Associate Professor Rehana Leak, Duquesne University, USA

氨基末端乙酰化的 Alpha 突觸核蛋白PFF

來自: University of Toronto, Canada

來自: StressMarq Biosciences; internal results

Alpha 突觸核蛋白寡聚體

與不溶性原纖維相比，寡聚體是小的（25-30 nm）球狀可溶結(jié)構(gòu)。它們是與帕金森病相關(guān)的有毒聚集體，在結(jié)構(gòu)上與原纖維不同。

負(fù)染色（鈾酰酸）的電子顯微鏡圖顯示了Alpha 突觸核蛋白的寡聚體結(jié)構(gòu)，左側(cè)為用多巴胺處理的alpha 突觸核蛋白寡聚

來源：EM performed at U. of British Columbia	來源：EM performed at U. of British Columbi	來源：EM performed at University of Toronto

Alpha 突觸核蛋白毒性

100 µg/ml 的各種 α-突觸核蛋白對(duì)原代小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元的毒性測(cè)試，一式四份：

孵育 24 小時(shí)后進(jìn)行 MTT 測(cè)定（左）和 LDH 釋放測(cè)定（右）。

來源: performed at QPS Austria GmbH

ATTO 594 標(biāo)記的原纖維也有聚集活性

ATTO594 標(biāo)記的 (目錄號(hào) SPR-322-A594) 人 1型 Alpha 突觸核蛋白PFF

ATTO 594 PFF 誘發(fā)人神經(jīng)元中的病理現(xiàn)象

神經(jīng)元培養(yǎng)試劑盒: 預(yù)分化的混合神經(jīng)元 (血細(xì)胞iPSC;) 每孔4000個(gè)細(xì)胞。

細(xì)胞染色:

     上: pSer129 α –syn 染色 (Alpha 突觸核蛋白抗體, StressMarq 目錄號(hào) SMC-600), 綠色

     中: ATTO 594 染色, 紅色

     下: 以上兩者復(fù)合圖, 外加肌動(dòng)蛋白 (粉色) 和DNA (藍(lán)色) 染色.

來源: ICC human iPSCs; CellState Biosciences, USA

ATTO-594 PFF 誘導(dǎo)大鼠腸神經(jīng)元中Alpha 突觸核蛋白聚集

Northeastern大學(xué)的研究人員使用 StressMarq 的 ATTO 594 標(biāo)記的 Alpha 突觸核蛋白 PFF（目錄號(hào) SPR-322-A594）來研究不同劑量下大鼠腸神經(jīng)元對(duì)熒光標(biāo)記的 PFF的吸收和保留。將前體原纖維 PD 模型應(yīng)用于丁酸鹽和脂多糖的共同給藥組，以模擬局部腸道微生物組的影響。

● 大鼠腸道和皮質(zhì)神經(jīng)元中 PFF 的攝取和保留具有顯著的劑量依賴性

● 加入了PFF 的腸神經(jīng)系統(tǒng) (ENS) 培養(yǎng)物的生長(zhǎng)錐形態(tài)發(fā)生變化

●  ENS 克服了 PFF 劑量以保持穩(wěn)定的活性

(A) 理論上的前體原纖維 (PFF) 毒性進(jìn)展的圖示，從 PFF 的引入到神經(jīng)元的攝取以及內(nèi)源 α-突觸核蛋白 (a-Syn) 的進(jìn)一步聚集。 (B) 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的時(shí)間表。 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，每 2-3 天喂養(yǎng)一次培養(yǎng)物。 (C) 為實(shí)驗(yàn)分離出來的神經(jīng)元群（皮質(zhì)和腸）的代表性圖像，方框圈出的對(duì)應(yīng)的解剖位置。

注: Bindas et al.

動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的Alpha 突觸核蛋白寡聚體

動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的alpha-突觸核蛋白 寡聚體的電鏡圖 (目錄號(hào) SPR-484）	(B)和(C)分別是凍融一次后的和37℃孵育兩周后 的尺寸排阻色譜(SEC)。在峰值處，90%SPR-484 在凍融后37℃下孵育兩周仍然穩(wěn)定于寡聚體狀態(tài)。

動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的 Alpha 突觸核蛋白寡聚體 (目錄號(hào) SPR-484) 穩(wěn)定于球狀的寡聚體結(jié)構(gòu)

動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的 Alpha 突觸核蛋白寡聚體

Tau-352 (胚胎 0N3R) & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維

Tau-352 和 Alpha 突觸核蛋白共聚體原纖維 （目錄號(hào) SPR-494）的電鏡圖	胚胎 Tau-352 0N3R & Alpha 突觸核蛋白共聚集體 原纖維的體外聚集硫磺素T檢測(cè)
來源: University of Toronto, Canada	來源: StressMarq Lab; internal results

Tau-441 (2N4R) & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維

Tau-441 和 Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維 (目錄號(hào) SPR-495) 的電鏡圖	Tau 2N4R & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維 的體外聚集硫磺素T檢測(cè)
來自: University of Toronto, Canada	來自: StressMarq Lab; internal results

Tau & Alpha 突觸核蛋白共聚集體原纖維的免疫-TEM

原纖維被吸附到碳涂層銅網(wǎng)格上。 6nm（asyn）和 12nm（tau）信號(hào)同時(shí)出現(xiàn)在共聚集體原纖維樣品的同一原纖維鏈中(目錄號(hào) SPR-494, SPR-495)，并且在對(duì)照 α-突觸核蛋白或 tau 原纖維中未觀察到抗體交叉反應(yīng)。

網(wǎng)格用含1% BSA 和 0.1% Tween-20 的 PBS 封閉，洗滌，然后依次在封閉緩沖液中用 20 µg/mL 的一抗孵育，洗滌，再在封閉緩沖液中用 20 µg/mL 的二抗孵育，洗滌并用2% 乙酸雙氧鈾作為負(fù)染色。

StressMarq Alpha 突觸核蛋白發(fā)表文獻(xiàn)

● 人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (1型)，目錄號(hào) SPR-322

1. Deciphering the role of hsp110 chaperones in diseases of protein misfolding. Yakubu, U. M. (2021) PhD Thesis, University of Texas.

2. Suppression of aggregate and amyloid formation by a novel intrinsically disordered region in metazoan Hsp110 chaperones. Yakubu, U.M. Morano, K.A. (2021) J Biol Chem Jan-Jun 2021;296:100567.

3. Design, Synthesis and Chemically Engineered Graphene Quantum Dot Applications: Contrast Agent for MR Imaging and Targeted Therapeutics on Parkinson’s Treatment. Poonkuzhali, K. et al. (2022) SSRN 4056733.

4. Rational Generation of Monoclonal Antibodies Selective for Pathogenic Forms of Alpha-Synuclein. Gibbs, E. et al. (2022) Biomedicines 10,2168.

5. LRP1 is a neuronal receptor for α-synuclein uptake and spread. Chen, K. et al. (2022) Molecular Neurodegeneration 17(1):57.

6. Granulovacuolar degeneration bodies are independently induced by tau and α-synuclein pathology. Jorge-Oliva, M. et al. (2022) Alzheimer’s Research and Therapy (14)187.

7. Disrupting the α-synuclein- ESCRT interaction with a peptide inhibitor mitigates neurodegeneration in preclinical models of Parkinson’s disease. Nim, S. et al. (2023) Nat Commun 14, 2150.

● 小鼠 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (1型)，目錄號(hào) SPR-324

1. The SUMO conjugase Ubc9 protects Dopaminergic cells from cytotoxicity and enhances the stability of α-synuclein in Parkinson’s disease models. Verma, D.K. et al. (2020) eNeuro 0134-20.2020.

2. Alpha-Synuclein Preformed Fibrils Induce Cellular Senescence in Parkinson’s Disease Models. Verma, D.K. et al. (2021) Cells 10, 1694.

3. Heat Shock Protein 70 as a Sex-Skewed Regulator of α-Synucleinopathy.Bhatia, T. N. et al.  (2021) Neurotherapeutics Oct;18(4):2541-2564.

4. Domain-Independent Inhibition of CBP/p300 Attenuates α-Synuclein Aggregation. Hlushchuk, I. et al. (2021) ACS Chemical Neuroscience Jul 7;12(13):2273-2279.

5. A Novel NOX Inhibitor Treatment Attenuates Parkinson’s Disease-Related Pathology in 小鼠 Models. Ghosh, A. A. et al. (2022) Int J Mol Sci 23, 4262.

6. Cell Culture Media, Unlike the Presence of Insulin, Affect α-Synuclein Aggregation in Dopaminergic Neurons. Hlushchuk, I. et al. (2022) Biomolecules 12, 563.

7. Targeted degradation of ?-synuclein aggregates in Parkinson’s disease using the AUTOTAC technology. Lee, J. et al. (2023) Mol Neurodegeneration 18, 41.

● 人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維: ATTO-594 (1型)，目錄號(hào) SPR-322-A594

1. Aggregation of alpha-synuclein in enteric neurons does not impact function in vitro. Bindas, A.J. et al. (2022) Sci Rep 12, 22211.

● 人 Alpha 突觸核蛋白A53T 突變型前體原纖維 (1型)，目錄號(hào) SPR-326

1. Environmental enrichment reduced pathological α-Synuclein accumulation by restoring LAMP1 via Reelin in early stage of Parkinson’s disease. Cho, E. (2021) PhD Thesis, Yonsei University.

2. Reelin Alleviates Mesenchymal Stem Cell Senescence and Reduces Pathological α-Synuclein Expression in an In Vitro Model of Parkinson’s Disease. Cho, E. (2021) Genes 12, 1066.

3. Reelin protects against pathological alpha-synuclein accumulation and dopaminergic neurodegeneration after environmental enrichment in Parkinson’s disease. Cho, E. et al. (2022) Neurobiology of Disease 175:105898.

● 人 Alpha 突觸核蛋白前體原纖維 (2型), 目錄號(hào) SPR-317

1. Directed Evolution of Antibodies Against Complex Targets. Desai, A. (2021) PhD Thesis, University of Michigan.

2. Observation of α-Synuclein Preformed Fibrils Interacting with SH-SY5Y Neuroblastoma Cell Membranes Using Scanning Ion Conductance Microscopy. Feng, C. et al. (2022) ACS Chemical Neuroscience. DOI: 101021/acschemneuro.2c00478.

3. Flow cytometric isolation of drug-like conformational antibodies specific for amyloid fibrils. Desai, A. et al.(2023) bioRxin preprint. (Also cited catalog# SPR-332, SPR-324 & SPR-484)

● 人 Alpha 突觸核蛋白單體 (1型), 目錄號(hào) SPR-321

1. Deciphering the role of hsp110 chaperones in diseases of protein misfolding. Yakubu, U. M. (2021) PhD Thesis, University of Texas.

2. Suppression of aggregate and amyloid formation by a novel intrinsically disordered region in metazoan Hsp110 chaperones. Yakubu, U.M., Morano, K.A. (2021) J Biol Chem Jan-Jun 2021;296:100567.

● 人 Alpha 突觸核蛋白寡聚體 (動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的), 目錄號(hào) SPR-484

1. LRP1 is a neuronal receptor for α-synuclein uptake and spread. Chen, K. et al. (2022) Molecular Neurodegeneration 17(1):57.

其他相關(guān)產(chǎn)品:  StressMarq的 Alpha 突觸核蛋白抗體

總 結(jié)

● 多種α突觸核蛋白聚集體可誘發(fā)疾病

● StressMarq 研發(fā)了一系列 α 突觸核蛋白，包括： 兩種類型的人源 α 突觸核蛋白 PFF； A53T 突變型原纖維； N-乙酰化原纖維；小鼠和大鼠 PFF；未成熟的原纖維；動(dòng)態(tài)學(xué)穩(wěn)定的寡聚體；鹽酸多巴胺穩(wěn)定的寡聚體、EGCG 穩(wěn)定寡聚體、tau 和 α 突觸核蛋白共聚集體原纖維

● 一些 PFF 由相同的起始單體原料制成，在 EM 下看起來形態(tài)相似，但它們是在不同的條件下聚集生產(chǎn)的PFF

● 不同的α突觸核蛋白形式具有明顯不同的神經(jīng)元和生理活性

● 單體、寡聚體、原纖維和纖絲α突觸核蛋白都與帕金森病有關(guān).

● StressMarq 提供各種工具用于突觸核蛋白病研究

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